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胰岛素的制取方法:从冻胰中提取
来源:天魅网 发布时间:2013-4-26 浏览次数:2201

  将冻胰用刨胰机刨碎,加入2.3~2.6倍85%~88%乙醇和5%的草酸,在10~15℃搅拌提取3h,离心。滤渣用1倍量68%~70%乙醇和0.4%的草酸提取2h,离心分离。两次提取液合并。提取液在搅拌下加入浓氨水调pH=8.0~8.4(液温10~15℃),立即过滤,除去碱性蛋白,得澄清滤液。滤液用硫酸酸化至pH=3.6~3.8,降温至5℃,静置4h,使酸性蛋白充分沉淀。吸上层清液至减压浓缩罐中,下层用帆布过滤。滤液并入上清液,在30℃以下减压蒸去乙醇,浓缩至原体积的(1/9)~(1/10)。浓缩液转入去脂锅内,快速加热至50℃后,立即用冰盐水降温至5℃,静置3~4h,分离出下层清液(上层脂层也可回收胰岛素),调节pH=2.3~2.5,于20~25℃在搅拌下加入27g/L固体氯化钠,保温静置约2h。析出的盐析物即为胰岛素粗品。盐析物按干重计算,加入7倍量蒸馏水溶解,再加入3倍量的冷丙酮,使溶液中水和丙酮的比例为7:3。充分搅拌,低温放置过夜,使溶液冷至5℃以下,次日在低温下离心分离,或滤出沉淀,得除酸性蛋白的滤液。在滤液中加入4mol/L氨水使pH=6.2~6.4,按溶液体积加入3.6%的20%醋酸锌溶液,再用4mol/L氨水调至pH=6.0,低温至过夜,次日过滤,分出沉淀。沉淀用冷丙酮洗涤,得干品(每千克胰脏可得0.1~0.125g干品)。按干品质量每克加冰冻2%柠檬酸50ml、65%醋酸锌溶液2ml、丙酮16ml,并用冷水稀释至100ml,使充分溶解。然后冷到5℃以下,用4mol/L氨水调至pH=8.0,迅速过滤,得除碱性蛋白的滤液。滤液立即用10%柠檬酸溶液调pH=6,并补加丙酮,使整个溶液体系保持丙酮含量16%。然后慢速搅拌3~5h,使结晶析出,再转入5℃左右冷室放置3~4天,使结晶完全。离心收集结晶,并小心去除上层黄色的无定形沉淀,用蒸馏水或醋酸铵溶液洗涤,再用丙酮、乙醚脱水,离心,干燥,即得胰岛素结晶。




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