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玻璃酸酶的制备方法:从牛羊睾丸提取
来源:天魅网 发布时间:2013-3-17 浏览次数:2519

  玻璃酶酸的制取方法
  将冷冻的羊和牛睾丸用刀切开,剥除内外层及副睾丸,绞碎成糜浆。称取糜浆100kg倒入预先配好的冷醋酸液(水90kg,冰醋酸600ml,1mol/L盐酸10L混合而成)中,在-5℃下激烈搅拌3~4min,以后每隔5min搅拌一次,提取4h。然后过滤,得提取液125~140L。浆渣进行第二次提取,提取酸液用量为第一次用量的1/3,合并提取液。在不断搅拌下,每升提取液加硫酸铵210g,完全溶解后,静置1L左右,用涤纶布吊滤过夜,得滤液110L。然后再按每升滤液加入硫酸铵290g,使完全溶解,静置1h,吊滤过夜,得玻璃酸酶粗品。将粗品溶于5L冷蒸馏水中,搅拌下加入硫酸铵125g,使完全溶解,在10℃放置过夜。除去液面脂肪,虹吸出上层清液,并过滤。滤液在不断搅拌下,再缓缓加入硫酸铵750g,使完全溶解,在10℃左右放置过夜。次日吸去上层清液,得盐析物。将盐析物溶入500ml冷的蒸馏水中,装入透析袋,置于25L,pH=6.5磷酸盐-柠檬酸缓冲溶液(柠檬酸7.5g,Na2HP4 12H2O60g,氯化钠70g,用水配成2500ml,用柠檬酸调整pH=6.5)中,于约10℃透析24h后过滤,得透析液。透析液于冰浴中冷却,加入15%Na2HPO4 12H2O溶液50ml,在不断搅拌下,缓缓加入20%-水乙酸钙溶液30ml,并以0.5mol/L氢氧化钠溶液调pH=8.5,继续搅拌10min,减压过滤,滤液以0.5mol/L盐酸调pH=7.0,冷冻干燥,得无热原玻璃酸酶精品。收率为每公斤睾丸得2 10e4单位以上。




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